【考马斯亮蓝测定蛋白质含量】考马斯亮蓝法（Bradford法）是一种广泛用于测定蛋白质含量的比色分析方法。该方法基于考马斯亮蓝G-250染料与蛋白质结合后颜色发生改变的原理，通过分光光度计在595 nm波长下测定吸光度，从而计算出蛋白质的浓度。因其操作简便、灵敏度高、干扰少等优点，被广泛应用于生物化学实验中。
一、基本原理
考马斯亮蓝G-250在酸性条件下呈红色，当它与蛋白质结合后，其最大吸收波长由465 nm移至595 nm，并呈现蓝色。这种颜色变化与蛋白质浓度成正比，因此可以通过比色法进行定量分析。
二、实验步骤简要总结
| 步骤 | 内容 |
| 1 | 准备标准蛋白溶液（如牛血清白蛋白） |
| 2 | 配制考马斯亮蓝试剂（含磷酸、乙醇、考马斯亮蓝G-250） |
| 3 | 取不同浓度的标准蛋白溶液，加入考马斯亮蓝试剂 |
| 4 | 混匀后静置5~10分钟，使染料与蛋白质充分结合 |
| 5 | 使用分光光度计在595 nm波长下测定吸光度 |
| 6 | 绘制标准曲线（吸光度 vs 蛋白质浓度） |
| 7 | 测定未知样品的吸光度，根据标准曲线计算蛋白质浓度 |
三、优缺点对比
| 项目 | 优点 | 缺点 |
| 灵敏度 | 高，可检测微克级蛋白质 | 对某些蛋白质不敏感 |
| 操作性 | 简单快捷 | 需要准确配制试剂 |
| 干扰因素 | 受去垢剂影响小 | 受高浓度盐类干扰 |
| 标准品 | 常用BSA作为标准 | 不同蛋白质可能产生偏差 |
四、注意事项
- 实验前需确保试剂新鲜，避免污染。
- 标准曲线应使用多个浓度点，保证准确性。
- 若样品中含有强碱性或强酸性物质，需先进行中和处理。
- 避免剧烈震荡，以免破坏蛋白质结构或影响显色反应。
五、应用范围
考马斯亮蓝法适用于大多数常见的蛋白质测定，尤其适合以下情况：
- 快速筛查蛋白质含量
- 初步评估样品纯度
- 实验室常规检测
但不适用于含有大量去垢剂、高浓度盐或特定蛋白质的样品。
总结：考马斯亮蓝法是一种高效、实用的蛋白质定量方法，适用于多种实验场景。掌握其原理与操作要点，有助于提高实验结果的准确性和可靠性。
